Serpens venenum continet enzymes, qui vincula carboxyl ester hydrolyzae continet.Subiectae pro hydrolysi sunt phospholipides, acetylcholine et acetas aromatica.Hae enzymes tria genera includunt: phospholipasem, acetylcholinesterasem et esterasium aromaticum.arginine esterasis in venenis serpentis etiam hydrolyzare potest arginine syntheticum vel lysinum, sed maxime hydrolyzes dapibus peptidis vinculis in natura, unde ad protease pertinet.Enzymes hic agitantur solum in subiectas niensis agunt et in quolibet peptide vinculo agere non possunt.Inter has enzymes, functiones biologicae acetylcholinesterasis et phospholipases maioris momenti sunt ac plene pervestigatae sunt.Venena quaedam serpentis validam habent actionem esterasam aromaticam, quae hydrolyzare potest p-nitrophenyl ethyl niensis a - seu P-naphthalene acetate et indole ethyl niensa.Incognitum adhuc est utrum haec actio a enzyme independens vel noto latere effectus carboxylesteras efficiatur, nedum eius significationem biologicam.Cum Agkistrodon halys Iaponicus virus cum nitrophenyl ethyl niensis p-nitrophenylum portavit, et ethyl niensis iners, hydrolysatae p-nitrophenoli et phenol inerti non inventi sunt;Contra, si haec esters agere cum cobra Zhoushan species serpentis venenum et Bungarus multicinctus venenum serpentis, erunt cito hydrolyzed.Notum est haec venena aspidis validam cholinesterasem habere activitatem, quae potest esse responsabilis hydrolysis subiectorum superiorum.Nam egestas purus et at.(1971) multa venena serpentis ad Cobra familiae pertinentia retulit posse hydrolyze indole ethyl ester, naphthalene ethyl ester et butyl naphthalene ester.Venena haec serpentis proveniunt ex: aspidis, niger cervicis, aspidis nigri, cobra bilabiata, cobra aurea, cobra Aegyptia, aspidis regis, mamba aurei aspidis, mamba nigra, et mamba bilabiata alba.
Venenum serpens hydrolyzare potest methyl indolem ethyl niensis, quae subiecta est ad cholinesterasem determinandam in sero, sed hoc virus serpentis actionem cholinesterasem non ostendit.Inde patet quod in veneni aspidis esterasis ignota est, quae ab cholinesterase differt.Ad huius enzyme naturam cognoscendam, opus ulterioris separationis opus est.
1、 Phospholipase A2
(I) Overview
Phospholipase est enzyme quod glyceryl phosphate hydrolyze potest.Sunt 5 species phospholipasis in natura, scilicet phospholipasis A2 et phospholipasis.
A. , phospholipasem B, phospholipasem C et phospholipasem D. Venenum serpentis maxime continet phospholipasem A2 (PLA2), paucae venena serpentis phospholipases continent B, aliaeque phospholipases praecipue inveniuntur in texturis animalium et bacteria.Fig. 3-11-4 ostendit situs actionis harum phospholipasium hydrolysi substrati.
Inter phospholipases, PLA2 magis investigatum est.Fortasse enzyme in venenis serpentis studiosissimus.Subiectum est vinculum ester in secunda positione Sn-3-glycerophosphate.Haec enzyma late in venenis serpentis, apes venenis, scorpii venenis et texturis animalium inveniuntur, et PLA2 in quattuor venenis serpentis familiae copiosus est.Hoc enzyme quia cellas sanguineas rubentes frangit et hemolysin facit, etiam "hemolysin" appellatur.Hemolyticum lecithinase quidam et pla2 vocant.
Ludeeke primus invenit venenum serpentis posse compositum hemolyticum producere agendo in lecithin per enzymes.Post, Delezenne et al.Probatur quod, cum venenum aspidis agit in sero vel vitello equo, facit substantiam hemolyticam.Nunc notum est PLA2 directe agere posse in phospholipidis membranae erythrocytae, structuram erythrocytae membranae destruens et hemolysin directam faciens;Potest etiam agere in serum vel lecithin additum ad lecithin hemolyticum producendum, quod agit in cellulis sanguineis rubris ad hemolysin indirectam producendam.Etsi PL2 in quattuor familiis venenis serpentis abundat, contentum enzyme in variis venenis serpentibus paulo diversum est.Rattlesnake (C*
Anguis venenum pla2 actione infirma tantum ostendit.Tabula 3-11-11 illustrat comparationem actionis PLA2 10 majorum venenorum venenosorum in Sinis.
Tabula 3-11-11 Comparatio phospholipasis VIII actionis 10 venenarum serpentium in Sinis
Serpens venena
Adipem emissio
Acidum aliphaticum;
Cjumol/mg)
Actio hemolytica CHU50/^ g* ml)
Serpens venena
Dimitte pingue acida
(^raol/mg)
Actio hemolytica "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
undecim
Microcephalus ophis
quinque punctum unum nulla
kalyspallas
8. 68
bis mille octingenti
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Ophiophagus Anna
tria punctum octo duos
centesimo quadragesimo
Bnugarus fasctatus
7,56
ducenti octoginta
B. multicinctus
unum punctum novem sex
ducenti octoginta
Vipera Russelli
septem punctum nulla tribus
T, mucrosquamatus
unum punctum octo quinque
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
2） De separatione et purificatione
Contentum PLA2 in venenis serpentinis magnum est, et stabile est ad calefaciendum, acidum, alcali et denaturant, ut facile est purgare et separare PLA2.Methodus communis est primum e filtrationem gel e crudo veneni exsequi, deinde ion commutationem chromatographiam gerere, et deinde gradus iterari potest.Animadvertendum est glacialem desiccatio post chromatographiae PLA2 post ion-commutationem aggregationem facere non debere, quia congelatio siccitatis processum saepe auget vires ionicas in systemate, quod est elementum magni ponderis concursus PLA2 causantium.Praeter supra generales rationes, etiam sequentes methodi adhibiti sunt: ① Wells et al.Subiectum analogum PLA2 pro ligando coniunctionis chromatographia adhibitum est.Ligandum hoc ligandum ad PL2 in veneno serpentino cum Ca2+ ligare potest.EDTA plerumque pro eluent.Sublata Ca2+, affinitas decrescit inter PLA2 et ligand, et a ligando dissociari potest.Alii utuntur 30% organici solutione vel 6mol/L urea ut eluent.③ Chromatographia hydrophobica cum PheiiylSephar0SeCL-4B fiebat ut vestigium PLA2 in cardiotoxin removeret.④ Anti PLA2 anticorpus pro ligando usus est ad chromatographiam affinitatem faciendam in PLA2.
Hactenus magna vis serpentium plaz purgata est.Tu et al.(1977) PLA2 a venenis serpentinis purificatis ante 1975. Annis complura articulorum de separatione et purificatione PLA2 quotannis relata sunt.Hic, separationem et purificationem PLA a scholasticis Sinensium invenimus.
Chen Yuancong et al.(1981) Tres PLA2 species ab Agkistrodon halys Pallas in Zhejiang, quae in acidica, neutra et alkalina PLA2 dividi possunt, secundum puncta isoelectrica dividi possunt.Secundum suam toxicitatem, neutrum PLA2 magis toxicum est, quod notus est neurotoxin Agkistrodotoxin presynapticum.Alkaline PLA2 minus toxicum est, et acidicum PLA2 nullam fere toxicitatem habet.Wu Xiangfu et al.(1984) notas trium PLA2s comparavit, inter quas pondus hypotheticum, compositionem acidum amino, punctum N-terminalem, isoelectricam, stabilitatem thermarum, activitatem enzyme, toxicitatem et actionem hemolyticam.Eventus ostendit se similes ponderis hypotheticae et stabilitatis scelerisque, sed in aliis aspectibus differentias significantes habuisse.In aspectu enzyme actionis, acidum enzyme activitas altior erat quam actio enzyma alkalina;Effectus hemolyticus alcalini enzyme in rat cellulis sanguineis rubris fortissimus erat, sequitur enzyme neutrum, et acidum enzyme vix hemolyticum.Putatur ergo effectum hemolyticum PLAZ ad crimen pla2 moleculi referri.Zhang Jingkang et al.(1981) cristallum suum Agkistrodotoxin fecisse.Tu Guangliang et al.(1983) retulit toxicum PLA cum puncto isoelectric 7. 6 a veneno Viperae rotundi a Fujian remotum et purgatum, eiusque proprietates physicas et chemicae, compositionem acidorum amino et sequentium 22 residua amino acidi in N. -terminal definitae sunt.Li Yuesheng et al.(1985) alterum PLA2 e veneno Viperae rotundi in Fujian remotum et purificatum.Subunita PLA2 * est 13 800, punctum isoelectric 10.4, et actio specifica 35/xnioI/miri mg。 Cum lecithino substrata, optima pH enzyme est 8.0 et optima temperatura 65°C LD5 intravenously in mures injecta.Est 0.5 ± 0.12mg/kg.Haec enzyme effectus manifestos habet anticoagulantes et hemolyticos.Moleculum toxicum PL2 ex 123 reliquiis ex 18 amino acidarum generibus constat.Moleculum cysteinum (14), acidum asparticum (14) et glycinum (12), sed solum unum methioninum continet, et ejus N-terminalis residuum serine est.Comparatus cum PLA2 separatim a Tuguang, pondus hypotheticum et numerus residua amino acidorum duorum isoenzymorum simillima sunt, et compositio acidi amino etiam simillima est, sed numerus acidi aspartici et residua proline nonnihil differt.Guangxi rex aspidis venena serpentis dives continet PLA2.Shu Yuyan et al.(1989) PLA2 a veneno remotus, quod specialem actionem habet 3.6 temporibus quam originale venenum, hypotheticum pondus 13000, compositio reliquiarum acidorum 122 amino, punctum isoelectricum 8.9, et bonum scelerisque firmitatis.Ex microscopio electronico observatione effectus PLA2 in cellulis sanguineis fundamentalibus, videri potest effectum habere conspicuum in membrana sanguinis humani rubri cellae, sed nullum effectum manifestum habet in cellulis sanguineis hircinis rubri.Haec PLA2 manifestam retardationem effectum habet in celeritate electrophoreticae rubri sanguinis cellulis in hominibus, capris, leporibus et Guineae sues.Chen et al.Haec enzyme aggregationem laminae inhibere potest ab ADP, collagen et sodium arachidonicum acidum.Cum PLA2 detentio est 10/xg/ml~lOOjug/ml, aggregatio laminarum penitus inhibetur.Si laminae lotae ut materiae adhibitae sunt, PLA2 aggregationem inhibere non potuit ad intentionem 20Mg/ml.Aspirin est inhibitor cyclooxygenas, qui effectum PL2 in plateis inhibere potest.PLA2 inhibere potest aggregationem in lamella per hydrolyzando acidum arachidonicum ad synthesim thromboxane A2.Solutio conformationis PLA2 ab Agkistrodon halys Pallas veneni in Zhejiang Provincia producta per dichroismum, fluorescentiam et UV effusionem studuit.Effectus experimentales demonstraverunt praecipuam catenam conformationis huius enzyme similem esse cum enzyme eiusdem generis ab aliis speciebus et generibus, conformatio sceleti bene caloris resistentiam habuit, et structuralis mutatio in acido ambitu convertitur.Coniunctio activatoris Ca2+ et enzyme residua ambitum tryptophanorum non afficit, dum inhibitor Zn2+ contrarium facit.Modus quo pH solutionis valorem afficit enzyme activitatem, differt a superioribus reagentibus.
In processu PLA2 purgationis veneni serpentis, phaenomenon evidens est quod venenum serpentis duo vel plura elutionis cacumina PLA2 continet.Hoc phaenomenon sic explicari potest: ① propter existentiam isozymorum;Unum genus PLA2 in mixtis pla2 variis cum ponderibus hypotheticis variis polymericis, quarum pleraeque in 9 000~40 000 sunt;③ Compositio PLA2 et aliorum venenorum serpentium complicata PLA2;④ Quia amidum vinculum in PL2 hydrolyzatum est, crimen mutatur.Et communes sunt, paucis exceptis, ut PLA2 in venenum serpentis CrWa/w.
Duae sunt condiciones: et .Tertia conditio in PLA2 venenis sequentium serpentium inventa est: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a^er, vipera Palaestinae, vipera arena, et crepundia terribilia km。
Effectus casus migrationem celeritatem PLA2 mutationem in electrophoresi facit, sed compositio acidi amino non mutat.Peptides hydrolysi rumpi possunt, sed fere vinclis divulsis vincuntur.Venenum foveae orientalis rattlesnake duas continet formas PLA2, genus a et genus p PLA2 nomine respective.Discrimen inter has duas species PLA2 unum tantum est acidum amino, hoc est, glutamine in uno PLA2 moleculo, substituitur ab acido glutamico in moleculo altero PLA2.Tametsi accurata huius differentiae ratio non liquet, vulgo creditur quod ad deminationem PL2 refertur.Si PLA2 in viperino Palaestinae veneno crudo tepefactum est, finis aggregationis in moleculis enzyme plus quam ante fiet.Ab C PLA2 a veneno serpentis remotus duas habet differentias N terminales, et pondus ejus hypotheticum est 30000. Hoc phaenomenon causari potest ab asymmetrico dimer PLA2, quod est simile symmetrico dimer formato a PLA2 in venenis adamantinis orientalis crepundiis et occidentis diamondback rattlesnake.Asinus aspidis ex multis speciebus componitur, quarum aliquae in classificatione non satis certae sunt.Exempli gratia, quae dicuntur Cobra Exterior Caspiae species nunc cognoscuntur
Exteriori maris Caspii Cobra tribuendus est.Cum multae species sunt et inter se commiscentur, compositio veneni serpentis valde propter diversos fontes variat, et materia PLA2 isozymorum alta est.Puta fel fel
Species saltem 9 PLA2 isozymorum r^ll species inventae sunt, et 7 species isozymorum PLA2 in venenis aspidis species Caspiae inventae sunt.Durkin et al.(1981) PLA2 contentum et numerum isozymorum in diversis venenis serpentis, inclusa 18 venenis aspidis, venenis 3 mamba, 5 venenis viperinis, 16 venenis crepundiis et venenis serpentum 3 marinis.In genere, pla2 actio veneni aspidis alta est, cum multis isozymis.PLA2 activitas et isozyma viperarum veneni sunt media.PLA2 actio mamba veneni et rattlesnake virus valde humile vel nulla actio PLA2 est.Pla2 actio serpentis marini est etiam humilis.
Nuper in hisce annis non relatum est PLA2 in venenis serpentinis existere in forma dimeri activi, qualis est rhombophora orientalis rattlesnake (C. venenum serpentis type a et typus PLA2 continet, quorum utrumque ex duobus subunitis identicis componitur. et solum dimerase has
Actio.Shen et al.etiam proposuit solum veneni serpentis obscuriores PL2 formam enzyme activam esse.Studium structurae localis etiam probat PLA2 rattlesnake adamantinas occidentalis in forma dimeriana exsistere.piscive compositi
Duae sunt differentiae veneni serpentis PLA^ Ei et E2, in quibus est in forma dimer, dimer activum, et monomer dissociatus iners est.Lu Yinghua et al.(1980) ulterius investigavit proprietates physicas et chemicae et reactionem motuum E. Jayanthi et al.(1989) PLA2 (VRVPL-V) a veneno viperino segregatus.Pondus hypotheticum monomeris PLA2 est 10000, quod effectus lethalis, anticoagulantis et OEDEMAE habet.Polymerorum enzyme polymerorum diversis ponderibus hypotheticis sub conditione PH 4.8, et polymerizationis et moleculares pondus polymerorum incremento caliditatis augere potest.Pondus hypotheticum polymerum in 96 ° C generatum est 53 100 , et pla2 actio polymerorum in duobus augetur.
Post tempus: Nov-18-2022